兔白細胞介素8（IL-8）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 檢測范圍： 96T 3 ng/L -100 ng/L 使用目的： 本試劑盒用于測定兔血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素8（IL-8）含量。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔白細胞介素8（IL-8）水平。用純化的兔白細胞介素8（IL-8）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素8（IL-8），再與HRP標記的白細胞介素8（IL-8）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素8（IL-8）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔白細胞介素8（IL-8）濃度。 | 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | | 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（200ng/L） | 0.5ml×1瓶 | | 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | | 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 | | 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 | | 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 | 標本要求 1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 | 100 ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 | | 50 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 | | 25 ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 | | 12.5 ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 | | 6.25 ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 | 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 操作程序總結： 計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月 |
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