復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響
竇群立1，袁韓濤2，黃雅松2，申海濱2
（1．陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712000；2．陜西中醫(yī)藥大學，陜西 咸陽 712000）

【摘要】目的 探討復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響。方法 選取SPF級成熟年齡SD大鼠75只，隨機分成五組，各15只：生理鹽水組、復方苦參黃柏溶液組、氧療組、復方苦參黃柏溶液+氧療組、康復新液組。適應性喂養(yǎng)1周后進行造模，并于造模成功之后的第2天開始給藥，在造模后的第3天、第7天、第10天、第14天觀察創(chuàng)面組織學的改變。在第3天、第7天、第14天對創(chuàng)面進行標本采集，用ELISA檢測標本中EGF、VEGF、TGF-β的含量。結果 創(chuàng)面組織學生長情況：在檢測的同一時期，復方苦參黃柏溶液+氧療組成纖維細胞數(shù)量，新生毛細血管，膠原纖維等生長明顯強于其余四組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。生理鹽水組差，其余三組介于三者之間且差異不大。標本中EGF、VEGF、TGF-β含量檢測情況：在檢測的同一時段，復方苦參黃柏溶液+氧療組EGF、VEGF、TGF-β含量明顯高于其余四組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），生理鹽水組EGF、VEGF、TGF-β含量低，其余三組EGF、VEGF、TGF-β含量介于三者之間且差異不大。結論 復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠的創(chuàng)面修復有促進作用、亦可提高組織中EGF、VEGF、TGF-β的含量，且三者對創(chuàng)面的修復可能具有相關性。

【關鍵詞】復方苦參黃柏溶液；氧驅(qū)動霧化；創(chuàng)傷修復；EGF；VEGF；TGF-β

【中圖分類號】R856.2

【文獻標識碼】B

【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.12.192.03
當前經(jīng)濟化的高速的發(fā)展，創(chuàng)傷的發(fā)病情況成為心臟病、腦血管病、腫瘤疾病之后，導致人類傷殘甚至死亡第四個原因[1]。本實驗從傳統(tǒng)中藥聯(lián)合局部氧療治療創(chuàng)傷修復的思路出發(fā)，結合傳統(tǒng)中藥與氧療的方法，創(chuàng)新氧驅(qū)動中藥霧化局部外治的新型治療方法，實驗研究復方苦參黃柏溶液氧驅(qū)動霧化外治對創(chuàng)傷修復模型大鼠的治療作用，并對其作用機理進行初步探討，以期為治療創(chuàng)傷皮膚修復提供新方法，并為新治療方法提供實驗依據(jù)?，F(xiàn)將實驗方法及結果報道如下。
1 材料與方法
1.1 動物
清潔級SD大鼠75只，雄性，體重大約在200～250 g，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK（軍）2012-0007），在實驗動物中心適應性飼養(yǎng)1周。
1.2 藥物與試劑
復方苦參黃柏溶液的組成有：苦參30 g、黃柏20 g、蒼術15 g、艾葉10 g、重樓25 g、花椒12 g。由陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房提供，飲片經(jīng)提純加工成每10 mL相當于原藥材3.5 g的溶液，由陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑中心提制備?？祻托乱河伤拇ê冕t(yī)生攀西藥業(yè)有限責任公司提供。TGF-β、VEGF、EGF試劑盒由上海恒遠生物科技有限公司提供。
1.3 主要儀器
離心機，KDC-40（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；酶標儀，RT-6000（深圳雷杜生命科學股份有限公司）；自動組織包埋機，STD-30（德國萊卡公司）；組織切片機，KHF-524（德國萊卡公司）等。
1.4 方法
1.4.1 造模
造模前大鼠背部脫毛、稱重，腹腔注射10%戊巴bi妥鈉3.5 ml/kg麻醉后，消毒鋪巾，在脊旁0.5 cm兩側，各作一個1.6*1.6 cm2矩形標記，切除全層皮膚，止血后用無菌紗布包扎，常規(guī)飼養(yǎng)。
1.4.2 分組及換藥
造模完成后，利用隨機法分組。造模成功后第2天，按文獻方法折算大鼠用藥量 [2]。模型組：15只，每天用生理鹽水濕敷創(chuàng)面20 min。中藥組：15只，每天用復方苦參黃柏溶液濕敷創(chuàng)面20 min。氧療組：15只，每天局部氧療20分鐘。
4.康復新液組：15只，每天用康復新液濕敷創(chuàng)面20 min。中藥氧療組：15只，每天用氧驅(qū)復方苦參黃柏溶液霧化創(chuàng)面20 min。霧化步驟：10 ml復方苦參黃柏溶液加入儲藥罐內(nèi)，通過連接霧化嘴、霧化器儲藥罐、吸入管與氧氣導管作為霧化管道，調(diào)節(jié)氧氣裝置直至儲藥罐有霧化液氣出現(xiàn)，用霧化液氣對創(chuàng)面進行治療。換藥每天1次，共14天，各組治療完成后用無菌敷料包扎創(chuàng)面。
1.4.3 取材
對創(chuàng)面干預后第3、7、14天。每組5只大鼠，消毒，鋪巾，切除全層皮膚不傷及皮下脂肪及深筋膜，采取標本后頸椎脫臼處死實驗動物。標本一部分稱取重量，加入一定量的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），備用。使用時，用勻漿器將標本和PBS的混合物研磨充分。用離心機在轉速為2000～3000轉/分下保持20 min后移液槍收集上清液等待檢測各項指標。標本融化后仍然保持2～8℃的溫度，使用EGF、VEGF和TGF-β試劑盒進行細胞因子水平檢測；另一部分放在10%福爾馬林溶液中固定24 h，然后脫鈣48 h備用，后期做石蠟切片。

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