ELISA簡(jiǎn)介
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay) ，簡(jiǎn)稱ELISA，它是實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法。酶是能夠催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，其催化效力*人造催化劑，ELISA就是將抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新技術(shù)。使用酶去標(biāo)記抗原或抗體以后既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性， 也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準(zhǔn)確性高、檢測(cè)時(shí)間短、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)，適合于大批標(biāo)本的檢測(cè)，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)、醫(yī)療檢測(cè)以及免疫實(shí)驗(yàn)分析等領(lǐng)域。
ELISA基本原理
1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，并保持器免疫學(xué)活性。例如：蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與聚苯乙烯表面的疏水基團(tuán)能產(chǎn)生互作用而吸附。
2.抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，由此進(jìn)行定性或定量分析。
ELISA類別
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體，根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法，主要類型有雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法等。
雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原常用的方法，先將已知抗體連接在固相載體上，待測(cè)抗原與抗體結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，形成抗體-待測(cè)抗原-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗體原成正比。
競(jìng)爭(zhēng)法
當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的抗體結(jié)合位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。
雙抗原夾心法
雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。
間接法
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。
除了以上常見(jiàn)的4種檢測(cè)方法外，還有直接法、捕獲包被法、競(jìng)爭(zhēng)法（測(cè)抗體）、雙抗原夾心法、ABS-ELISA法等其他方法。
ELISA試劑盒樣本收集問(wèn)題分析
1.樣本的收集液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。固體類標(biāo)本：植物，土壤，食品，藥品等
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。6. 組織標(biāo)本
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè)，其余冷凍備用，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨
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